液相色譜分析流動相中酸的選擇
更新時間:2022-12-02 點擊次數(shù):2647
磷酸、醋酸以及液相分析中常用到的酸(常見的還比如甲酸,三氟yi酸等),他們的主要區(qū)別和選擇在于:
磷酸的酸性比醋酸強(qiáng),就是說,磷酸可以把流動相的pH值調(diào)到更低。
有些酸有紫外本底,如甲酸,乙酸;有些沒有,如磷酸。這樣,在使用較低波長檢測的方法時,就要考慮使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波長檢測下應(yīng)該慎用。
有些酸是揮發(fā)性酸,如甲酸,乙酸,三氟yi酸等;有些不揮發(fā),如磷酸。使用不揮發(fā)酸,流動相的pH相對穩(wěn)定,而揮發(fā)性酸可能隨時間造成流動相pH緩慢改變。但是,不揮發(fā)酸的不揮發(fā)性,限制了它們在液質(zhì)聯(lián)用時候的使用。
酸的離子強(qiáng)度不同,離子強(qiáng)度在很多情況下影響被分析物的解離和性質(zhì),造成保留和峰型的改變,通常離子強(qiáng)度為: 三氟yi酸>磷酸>甲酸>乙酸。離子強(qiáng)度很高的酸,通常會對液質(zhì)聯(lián)用產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制,如三氟yi酸,幾乎可以讓負(fù)模式掃描信號全部被抑制。
實例:甘草酸銨含量測定液相色譜分析,結(jié)構(gòu)式:
使用初始方法濃度36.5%醋酸進(jìn)行柱子篩選:
1)條件為:甲醇:醋酸:水=78:0.3:22,柱溫30,流速1mL/min,
Ultimate® LP-C18 (4.6*250mm,5μm),效果圖:
分析:此條件下基本分離,但雜質(zhì)靠近主峰。
2)改變流動相比例為甲醇:醋酸:水=75:0.3:25,柱溫30,流速1mL/min,Ultimate® LP-C18(4.6*250mm,5μm),效果圖:
分析: 主峰包含雜質(zhì)峰,分離度降低。
3)保持原流動相比例,改變柱溫為25度,效果圖:
分析:此條件下分離度>1.5,雜質(zhì)距離主峰較遠(yuǎn)。
4)使用同款色譜柱重現(xiàn),效果圖:
1)使用濃度99.5%的冰醋酸,條件為:甲醇:冰醋酸:水=78:0.3:22,柱溫40,流速1mL/min,篩選zui 優(yōu)柱子月旭Topsil® C18(4.6*250mm, 5μm),效果圖:
2)改變流動相比例為甲醇:冰醋酸:水=72:0.3:28,柱溫40,流速1mL/min,Topsil® C18(4.6*250mm,5μm),效果圖:
3)改變柱溫為30,流動相比例為甲醇:冰醋酸:水=72:0.3:28,流速1mL/min,Topsil® C18(4.6*250mm,5μm),效果圖:
分析:分離度>1.5,達(dá)到要求。
4)多針重現(xiàn),效果圖:
結(jié)論:使用36.5%醋酸的流動相體系時,在合格的色譜柱條件下,選擇4支重現(xiàn),保留時間差異大??蓮囊韵陆嵌确治觯?/p>
1)該物質(zhì)本身就是一個兩性離子,有弱酸和弱堿離子,在此條件下,流動相本身的緩沖作用很有限。
2)流動相的pH在4-5之間,這時候在反相C18中硅羥基的解離狀態(tài)是zui活躍的時候(硅羥基的pKa在4.2至4.5之間),物質(zhì)對填料狀態(tài)以及柱子之間的差異很敏感,體現(xiàn)在用不同支的色譜柱差異大。在檢測甘草及其制品中的該物質(zhì)時,均出現(xiàn)過這樣的現(xiàn)象。
3)醋酸屬揮發(fā)性酸,在使用36.5%乙酸和99.5%冰乙酸時,等量的變化在兩種流動相體系中的影響程度不同,引起色譜結(jié)果差異性不同。